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La Unidad de Microscopía, proporciona a los investigadores del IIS La Fe y de otras instituciones de investigación y/o empresas, la infraestructura y la experiencia necesarias para el estudio, mediante el uso de diferentes técnicas microscópicas, de material biológico procedente tanto de muestras de pacientes (biopsias , autopsias ... ) como de estudios experimentales (animales, cultivo de células ...).

Para ello, la Unidad de Microscopía se divide en un área destinada a la microscopía óptica que cuenta con microscopios para campo claro, fluorescencia y DIC y un microscopio confocal provisto con un sistema de incubación que permite estudios en células vivas por cortos periodos de tiempo y otra zona de microscopía electrónica que consta de un laboratorio equipado para la preparación de muestras y un área de ultramicrotomía.

Esta infraestructura permite el estudio de muestras biológicas, obteniéndose imágenes de elevada resolución, y también la observación de tejidos, células, orgánulos y microorganismos, a elevados aumentos, lo que permite incluso, la localización de la expresión de proteínas a nivel celular por técnicas de inmunocitoquímica.

SERVICIOS

Observación y captura de imágenes de muestras con tinciones histológicas.

Tratamiento de la muestra para microscopía de fluorescencia

-Marcaje fluorescente
-Inmunofluorescencia

Observación de muestras y captura de imágenes en microscopio de fluorescencia

Observación de muestras y captura de imágenes en microscopio confocal

Procesado de muestra para microscopía electrónica de transmisión

-Fijación química
-Contrastado (tetróxido de osmio y acetato de uranilo)
-Deshidratación en gradiente de alcoholes (etanol, metanol)
-Inclusión en resina epoxi (EPON 812) o acrílica (Lowicryl K4M)

Ultramicrotomía

-Obtención de secciones semifinas ( 0,5-2 micras ) para microscopía óptica  y secciones ultrafinas ( 60-100 nm) para microscopía electrónica .
-Contrastado de las mismas

Inmunopreparación para microscopía electrónica (inmuno oro)

-Preembbeding
-Postembbeding

Preparación de muestras biológicas a baja temperatura para microscopía electrónica

-Criosustitución
-Inclusión a baja temperatura

Observación de muestras y captura de imágenes en microscopio electrónico de transmisión

Servicios de asesoría

-Estudio preliminar de la propuesta
-Diseño experimental y elaboración de protocolos específicos para cada tipo de material biológico y los aspectos concretos que se quieran estudiar.
-Asesoramiento para la continuidad del estudio.
-Colaboración completa en proyecto.

APLICACIONES

Estudio de células y tejidos normales o patológicos mediante tinciones histológicas.

Estudio de las estructuras y componentes celulares, utilizando marcaje fluorescente simple o múltiple (aplicable a numerosos estudios, tales como apoptosis, proliferación celular, localizaciones subcelulares, expresión de proteínas…).

Análisis de la ultraestructura de células y tejidos. Observación de cambios morfológicos en diferentes condiciones patológicas o experimentales.

Observación de la estructura y la morfología de virus y bacterias. Detección " in situ" de paRtículas virales y observación de alteraciones citológicas en el hospedador.

Inmunolocalización de antígenos y de expresión de proteínas a nivel celular (núcleo, citoplasma, membrana plasmática...) en cultivos celulares y tejidos.

Estudios de internalización de proteínas conjugadas con oro coloidal.

Análisis de los efectos causados ​​por la administración de drogas o medicamentos en las células y tejidos.

EQUIPAMIENTO

-Microscopio Óptico Leica XDM 500 con Objetivos 4x 10x 20x 40x 100x.

-Estereomicroscopio binocular  OPTIKA SZM-1. Zoom 0,7x a 4,5x. Iluminador mediante lámparas halógenas 12V/15W.

-Microscopio invertido de contraste de fases OPTIKA XDS-2 con objetivos 4x 10x 20x 40x 100x.

-Microscopio digital Leica DMD108 con función lupa y Objetivos de 4x10x20x40x100x. Cámara digital y ordenador integrados. Alta fidelidad de color. Sin oculares, reduce las molestias físicas.

-Microscopio Leica DM2500 para campo claro,  contraste interferencia y fluorescencia. Objetivos de 5x 10x 20x 40x 63x oil 100x oil. Filtros para DAPI, Fluoresceina, Rodamina, Doble y Rojo lejano. Óptica de alto contraste. Sistema de adquisición y tratamiento de imagenes Leica LAS, con cámara Leica DFC3000 G, refrigerada de alta sensibilidad y alta velocidad.

-Microscopio Confocal Leica TCS-SP5-AOBS, con scanner resonante montado sobre microscopio invertido  DMI 6000 CS y equipado con líneas laser de excitación (Diodo 405, Ar, HeNe 543, HeNe 594, HeNe 633), tres detectores espectrales para fluorescencia y uno para iluminación transmitida. Dotado de sistema de incubación acoplable a platina.

-Ultramicrotomo Leica EM UC61I que permite una fácil preparación de secciones semi- y ultrafinas.

-Leica Automatic Freeze Substitution (AFS)  que permite la inclusión y polimerización de las muestras a baja temperatura.

 -Pyramitomo (Leica EM TRIM).

-Máquina para la fabricación de cuchillas de vidrio para ultramicrotomía (Leica EM KMR2).

CONTACTO

Responsable Científico-Técnico: Mª del Pilar Marín Muela, Ph.D.
Técnico: Inmaculada Montserrat.
Dirección: Instituto de Investigación Sanitaria La Fe, Torre A, Planta S. Avda. Fernando Abril Martorell 106. 46026 Valencia
Telf: 961246687 (ext. 246687)  Móvil: 618120400 (corp. 485 642)
e-mail: microscopia@iislafe.es

TARIFAS